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酶即不易失活,磷酸鹽緩沖液最接近于生理液體
當細胞破裂,將酶從其中分離出來以后,這些條件都不存在了,于
是在人造的緩沖液中,就面臨氧化、變性、以及活性部位遭受外界
因子的破壞。此外,酶也很容易為失去控制的蛋白酶所分解。為了
保持酶的活性,舉凡緩沖液的濃度、pH、溫度、輔因子、活性穩定
劑等種種因素都需加以考慮,但原則上以盡量能恢復到細胞中原來
的天然環境為準則。
緩沖液和pH的控制 以適當的緩沖液來控制pH是保持酶活性的
最基本條件。細胞里的pH一般都在6—8之間,所以如能把pH維持在
這個范圍之內,酶即不易失活。磷酸鹽緩沖液最接近于體內的生理
液體狀態,所以最為常用。但是帶有多個負電荷的磷酸根在濃度過
高時,有時對酶會發生抑制作用,這點要加以考慮。
酶活性的測定與保持
無論在分離酶的過程或酶被提純以后,都要隨時測定酶活性,
算出酶的比活性,用以觀察分離過程中各步細節的效能,粗酶的取
舍,及貯存期酶質量的變化。酶活性的測定乃酶動力學在實際方面
的應用。酶在不適當的環境下極易失活,所以如何才能保持酶的活
性長期不變,或緩慢地失活,是在分離酶時所必須解決的問題。
影響酶活性測定的因素
由酶的動力學研究。知道酶活性和底物、激活劑與抑制劑的濃
度、緩沖液的種類和濃度、pH、溫度、以及酶本身的濃度都有關系
。通常都盡量在最適當的條件下測量酶的活性,以求達到最大的酶
反應速度
不過限于種種原因,如底物的溶解度太低,或售價太高,或
有時尚需要其他連鎖的酶反應來輔助酶活性的測定,則這時必須對
酶活性測定的條件作適當的修正,方符合實際的需要。
底物濃度、激活劑及抑制劑 酶反應在底物的濃度達到最高的
合理濃度時會得到它最大的活性。
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