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利用化學(xué)反應(yīng)使產(chǎn)物物理方法測出化合物
化學(xué)法是利用化學(xué)反應(yīng)使產(chǎn)物變成一個(gè)可用某種物理方法測出
的化合物,然后再反轉(zhuǎn)來算出酶的活性。至于所采用的化學(xué)方法卻
無一定的原則可循。例如,脲酶(Urease)所催化的尿素水解反應(yīng)得
到產(chǎn)物NHa和二氧化碳。然后就可以用比色法,酸堿滴定法或氣體
體積量度法等各種方法宋測出酶的活性。如果反應(yīng)后在剩余的底物
存在下無法測出產(chǎn)物的量時(shí),就必需把二者先行分開,尤其在產(chǎn)物
和底物的結(jié)構(gòu)極相似寸,不把二者分開,化學(xué)反應(yīng)必發(fā)生混淆。
放射性化學(xué)法是由具有放射性的產(chǎn)物上測出全放射量,再算出
產(chǎn)物的量,從而計(jì)算這個(gè)反應(yīng)的酶活性。放射性化學(xué)法必需把放射
標(biāo)記的底物分離,而且要分離得很徹底,否則就很容易造成誤差。
分離手續(xù)常常很費(fèi)力費(fèi)時(shí),多用薄層硅膠、紙層析、離子交換等方
法來作。高效液相層析可分得比較徹底,但若處理的樣品很多,就
會(huì)感到特別麻煩。
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