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細菌染色方法
革蘭染色法
(1)玻片菌膜制法:
①涂片:取經脫脂并干燥(74 mm x 26 mm×1 mm)載玻片一塊,
加適量無菌生理鹽水,取少許菌苔于其中研勻并涂成1 cm×2 cm的
菌膜;液體培養物可直接涂片。
②干燥:置室溫或溫箱或火焰上方助其干燥。
③固定:將已干的菌膜在火焰上迅速來回通過3次(以不烤焦菌
膜為度),把菌烤死并固定在玻片上。
(2)革蘭染色方法:向已固定好的菌膜滴加結晶紫染液染1分鐘
,水洗;加革蘭碘液染≥1分鐘,水洗;用95%乙醇脫色,至菌膜
上無顏色脫下為止,水洗;然后加稀釋石炭酸復紅液染30秒至1分
鐘,水洗,待干。滴鏡油,用油鏡觀察菌體的形態。
染色結果:革蘭陽性菌為紫藍色,革蘭陰性菌為紫紅色。
(3)注意事項:
④涂片不宜過厚,火焰固定時溫度不宜過高。
②應定期檢查各種染色液質量,以免發生染色結果誤差。
③染色結果正確與否,除技術原因外,與菌齡和溶液pH值關系
較大。幼齡菌或pH值較高易染成陽性,衰老菌或pH值較低易染成陰
性結果。
2.單染色法在工作中,為了節約時間,對已知的革蘭陽性或
陰性菌,也可直接用一種染液(結晶紫或復紅)染相應時間后,水洗
、待干,鏡檢的做法。
3.芽胞染色法
(1)染色液:
①5%孔雀綠溶液。
②稀釋石炭酸復紅(革蘭第4染液)。
(2)玻片菌膜用火焰固定后,用孔雀綠染液(先蓋2層新華1號濾
紙以除雜質)56℃染30分鐘,水洗;復紅液染1分鐘,水洗;自然干
燥,油鏡鏡檢。
(3)結果:芽胞呈紫藍綠色,菌體呈紅色。
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