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本文標題："含細菌葉綠素的自養微生物-微生物分析顯微鏡"
新聞來源：未知 發布時間：2016-12-26 0:56:39 本站主頁地址：http://www.pzfczx.com
含細菌葉綠素的自養微生物-微生物分析顯微鏡
TIREM技術的優勢
理論上，BCM中所有含細菌葉綠素的自養微生物都能夠被IREM
法檢測到。然而在實際的野外海水樣中，由于藍細菌的豐度很大以
至于能夠造成BCM計數的嚴重誤差。而其他的光合自養生物由于豐
度較小或者細胞體積較大而不會造成BCM顯微計數的干擾。在這里
，集中解決的對象是主要的自然干擾者——藍細菌，尤其是在大洋
廣泛分布豐度又高的原綠球藻。基于紅外落式熒光顯微鏡、CCD自
動成像和圖像的數字化處理，為相同顯微鏡視野下的紅外細胞和藍
細菌細胞提供了精確的計數。
在落式熒光技術的應用中，若目標細胞太小或胞內色素含量太
低，常規設置的適用性一一尤其是激發光波長和強度都應在應用前
進行檢測。以原綠球藻為例，理論上，原綠球藻的最佳激發光是45
0～480 nm；但原綠球藻在這些激發光下很難進行顯微計數，因為
檢測時450～480 nm的激發光會使原綠球藻細胞淬滅得太快以至于
顯微鏡系統無法得到可信的數據。
原綠球藻細胞的觀察可維持一個更長的時間，從而使數據的獲得更
加容易。因此在TIREM法中統一采用546±12 rim的激發光，對聚球
藻和原綠球藻進行激發檢測。
當聚球藻和原綠球藻同時存在于樣品中時，由于這兩類主要的
藍細菌群發出不同強度水平的熒光，因此對藍細菌進行時間序列成
像是必要的。單位時間里強熒光顆粒所發出的光子要比弱熒光顆粒
發出的光子多，因此CCD在曝光時間內接受了絕大部分的來自強熒
光顆粒的光子，從而強熒光顆粒能夠在圖像中被清楚的顯示，而弱
熒光顆粒則不能從背景噪音中區別出來。
經過一段時間的激發光曝光后，聚球藻細胞的熒光衰退到一定
程度，原綠球藻細胞才逐漸變得可見。雖然聚球藻和原綠球藻的絕
對熒光強度隨著曝光時間的延長而下降，但根據熒光淬滅動力學理
論，熒光衰退也符合半衰期原理，因此在相同時間下強熒光的衰退
程度要比弱熒光的衰退程度顯著。
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