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大腸桿菌
如果不需要翻譯后的修飾,通常選擇大腸桿菌作為初始宿主。
大腸桿菌普及性的主要原因是人們對它有深厚的知識基礎。我們對
大腸桿菌生理和遺傳學的理解可能要遠超過其他任何生物。大腸桿
菌有非常寬廣的宿主背景(即特殊突變的組合),以及種類豐富的載
體和啟動子。這種龐大的知識基礎極大地便利了復雜的基因操作。
背景明確的載體和啟動子大大加快了合適生物催化劑的開發。
大腸桿菌有相對較高的生長速率,也能達到很高的細胞濃度(
大于509干重/L),并具借助于特殊的載體一啟動子組合而可能具
有很高的表達水平(約占總蛋白的25%~50%或更多),這導致了極
高的體積生產率。大腸桿菌也能在簡單廉價的培養基上生長。所有
這些因素給大腸桿菌帶來了許多經濟上的優勢。
開發能使大腸桿菌生長到高細胞密度的策略是一項重要的技術
貢獻。乙酸和其他代謝副產物的積累能夠顯著抑制生長。通過控制
葡萄糖的流加來阻止培養基中葡萄糖的大量積累可以阻止溢流代謝
和乙酸形成。如果能夠在線監測或預知葡萄糖消耗速率,可以將葡
萄糖流加和其消耗速率偶聯在一起進行流加控制。
但是,大腸桿菌并不是一種絕對完美的宿主。主要問題在于大
腸桿菌通常不分泌蛋白質。當蛋白質被保留在細胞內并達到一個很
高的水平時,溶解的活性蛋白質的量通常不再增加,這是因為蛋白
質的水解作用或形成了不溶解的包含體。
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