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用Ti質粒轉化植物細胞的途徑一旦獲得了帶有有用外源基因的重組
Ti質粒,下一步的工作就是利用這些質粒DNA去轉化植物細胞。最
直接的轉化方法當然是用含有這種Tj質粒的根癌農桿菌品系去感染
寄主植物的傷口,使之形成冠癭瘤。在這一過程中,Ti質粒的T一
區DNA就會轉移并整合到一部分冠癭瘤細胞中。被轉化的腫瘤細胞
由于具有能夠在沒有外源植物激素的條件下離體生長的特性,因此
可以在不含激素的培養基上篩選出來,然后進行單獨培養。這些細
胞在一定的條件下能夠增殖形成愈傷組織,并進一步分化再生出植
株來。這樣的植株就有可能代表了被轉化的細胞的分化產物,并可
能在育種中是有用的。
除了細菌感染以外,也可以通過各種途徑用Tj質粒去轉化離體
培養的植物細胞或原生質體。相比之下,這種離體轉化途徑具有一
定的優越性。由于轉化發生在單個的細胞中,通過選擇而獲得的由
這樣的轉化細胞形成的愈傷組織以至再生植株都由遺傳背景一致的
細胞組成,而通過整體植株感染得到的腫瘤則是一個由不同細胞組
成的混合體。如果腫瘤組織中僅含有少量被轉化的細胞,則對于整
個組織來說,那些標記基因的表型就不易被察覺出來。以下主要介
紹用Ti質粒轉化離體植物細胞的方法。
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