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應用反差增強技術的顯微鏡
從顯微鏡的基本結構可知,無論從最簡單的顯微鏡還是到最先進的顯微鏡,
光源、聚光鏡、物鏡、目鏡是顯微鏡的四個最重要的部件。光源的適當排列
和保持科勒照明與聚光鏡匹配可保證光強均勻地照射在樣品上。對于顯微鏡而言,
僅僅獲得均勻的照明光場是不夠的,還需要盡可能多地收集與樣品作用的光線。
使用顯微鏡明視野照明技術,圖像中的反差是由樣品各點依共光吸收的差異所
產生的,同時還與由光吸收物體所導致的衍射模式有關。如果顯微鏡明視野圖
像質量不令人滿意,那么可使用其他成像技術來提高顯微鏡圖像的反差(contrast)
暗視野照明(dark-field illumination)是一種用來增強樣品中吸收
或散射特征的反差的方法。暗視野照明光路的主要設計特點是設置了暗視
野聚光鏡。
暗視野聚光鏡是一種特殊的聚光鏡,它的作用是依靠緊鄰聚光鏡的不透
光物來遮擋住中間的大部分直射半線,形成一中空的光錐體,以一定的
傾斜角照射到樣品上,因此能夠進入物鏡成像的主要是由樣品所敞射的
光線。由于暗視場照明技術改變了樣品的吸收或散射,從而有益于反差
的增強。
暗視野照明方式最適合觀察微粒,可用于觀察活細胞的結構以及
細胞內微粒的運動狀態。
但暗視野照明方式不適合觀察染色的樣品,因為染色后減少了
樣品和周圍介質時間折射率的差別.將使暗視野的圖像質量下降。
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