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生物體或礦物本身具有自發熒光特點較少-
熒光顯微鏡常識
最大的限制就是必須要用螢光分子。然而自然界的材料,
不論是生物體或礦物,具有自發螢光特性的分子仍屬少數,大部分均需要外加染劑以標定目標分子。
另外要找到適合的螢光分子也很不容易。首先是螢光分子本身需要有適當的能階分佈或是特殊的化學結構變化,
能夠靠外加光場造成螢光效應的抑制。而且這些螢光分子還最好要能很快的從被抑制的狀態中恢復
,才能繼續進行下一個點的掃瞄。如果一旦一群螢光分子被抑制后得花上一秒才能恢復,
那么掃瞄一張 256 × 256 的影像就要耗費將近一天的時間,
不太實際。其次是針對想觀察的生物化學反應,不見得都能找到適合的螢光分子做標定。雖說如此,
只要有適當的螢光標定分子,STED 也能做到每秒超過 28 張影像的即時觀測[2],
讓研究者們對活體細胞中奈米尺度的生物化學現象有更直接的觀察
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