將片子置于顯微鏡下觀察染色結果

胞分佈，先將病理組織切片以 65℃烘烤 10 分鐘，放入第一瓶 xylene 染色缸 10 分鐘，轉換置第二瓶 xylene 染色缸 10 分鐘，除去包埋的石蠟，再將病理組織切片放入第一瓶 100％之無水酒精染色缸 3 分鐘，轉放入第二瓶100％之無水酒精染色缸 3 分鐘，再放入 95％之酒精染色缸 3 分鐘，接著放入 70％之酒精染色缸 3 分鐘之后，再放入 5％之酒精染色缸 3 分鐘，以自來水流水 5 分鐘，將玻片放入含 1X 微波液之染色缸于加熱器煮沸 30 分鐘，等待冷卻后，以 wash buffer (TBS，0.1％ Tween 20 )清洗一次 5 分鐘，使用 AEC Kit，將第一瓶(3％ H2O2)加一滴在組織表面上，5 分鐘，再以wash buffer 清洗 2 次，每次 5 分鐘，加入 100μL 一級抗體 (稀釋倍數 100倍)，將玻片放入染色反應盒室溫下 1 小時。再以 wash buffer 清洗 2 次，每次 5 分鐘，加入第二瓶，第二級抗體一滴，將玻片放入染色反應盒室溫下20 分鐘，以 wash buffer 清洗 2 次，每次 5 分鐘，加入第三瓶，呈色劑一滴，將玻片放入染色反應盒，呈色時間視顏色結果而定，若沒有呈色則等 10 分鐘為定，以二次純水沖洗使呈色停止反應，再以 hematoxyline 染 10 秒鐘，做對比染色 (counter stain)，再以自來水浸泡 5 分鐘，去除多馀之染色，放置室溫自然晾乾 (air dry)，加入一滴 Crystal mount 至玻片組織上抹平后晾乾，最后以阿拉伯膠 (Histomount)封片，將片子置于顯微鏡下觀察染色結果