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微生物分離與鑑定,一直以來都是生物醫(yī)學研究發(fā)展上相當重要的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的分析鑑定方法,須經過耗時的分離、培養(yǎng)、觀察、測試等程序。我們利用奈米金屬粒子陣列,建構一個可快速鑑測生物樣本的表面增強拉曼散射光譜系統(tǒng)。由于拉曼訊號以精確鑑定分子指紋,這套系統(tǒng)在蛋白質、酵素、DNA 等生物分子的結構與反應動態(tài)學研究都有許多應用。我們可利用增強拉曼光譜此項技術來鑑定不同的細菌。將細菌置放在奈米金屬粒子陣列上,細菌細胞壁上緊貼在金屬粒子表面上的分子所產生的拉曼光譜訊號就是我們采到的分子指紋。不同種細菌之間細胞壁的組成會有差異,因此我們會得到不同的增強拉曼訊號。首先我們以格蘭氏陽性菌 (Gram-positive)、格蘭氏陰性菌(Gram-negative) 和分枝桿菌 (mycobacteria) 三大類去量測其表面拉曼散射光譜 ( 圖二 )。格蘭氏染色法是常見的細菌鑑別染色法,利用不同細菌細胞壁對于染劑結晶紫滯留的差異性,可分成格蘭氏陽性菌與陰性菌。格蘭氏陽性菌之胞壁是由厚度約 20 至 80nm 的多層肽聚醣 (peptidoglycan) 組成。相較之下,格蘭氏陰性菌則通常具有約 1-7nm 的較薄肽聚醣層,在肽聚醣層外包覆了外膜及脂多醣 (lipopolysaccharides, LPSs),整體結構較為複雜。而分枝桿菌在許多生理特質上是異于一般細菌,其具有富含脂質的細胞壁又更為複雜,這使得分枝桿菌無法以一般格蘭氏染色法染色,要使用特殊的染劑以染色。而觀察其增強拉曼散射光譜,我們可以明顯將其分成三組不同的光譜型態(tài),并可對應其細胞壁組成的差異性。革蘭氏陽性菌其細胞壁組成最為簡單,主要由肽聚醣構成,其光譜表現(xiàn)出來的分子振動波峰 (peak) 最少 ; 陰性菌的細胞壁組成結構較多,包含肽聚醣及脂多醣的分子結構,其分子震動波峰則略有增加 ; 而分枝桿菌因其細胞壁結構最是複雜,光譜也顯現(xiàn)出最多的分子振動波鋒。而這樣的技術也可用于細菌的即時抗藥性反應實驗,藉由藥物破壞細菌外殼結構,立即在細菌的拉曼光譜上出現(xiàn)反應,而對藥物有抗藥性的細菌并不會有外殼結構的損害,細菌光譜舊維持不變,快速的反應出細菌對施加的藥物有無抗藥性,大大的縮減以往還需培養(yǎng)的時間
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