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本文標題:"植物材料以樹脂為基質樣品分析圖像顯微鏡"

新聞來源:未知 發布時間:2019-3-31 23:07:16 本站主頁地址:http://www.pzfczx.com

植物材料以樹脂為基質樣品分析圖像顯微鏡

    Rogers(1994)和Yang等(1997b)已經對來自于化石或者陳舊材料中DNA
的提取技術作了綜述。盡管他們的結論來自于動物的軟組織或者硬組織材
料,但Yang等(1997b)的大體結論也適用于植物材料,即沒有一種提取方法
總是最好的。一般地講,一種以樹脂為基質的提取方法,DNA吸附在硅膠上
,而蛋白類、脂類、多糖類被洗掉,這樣可以產生較干凈的提取物,但產
率一般低于用去污劑/酶消化和乙醇沉淀的產率。另外,雖然沉淀法的產
率,特別是添加共沉淀時,DNA片段的長度范圍大于用特定洗脫液和樹脂所
產生的DNA的片段,DNA片段的大小也影響硅膠提取或乙醇沉淀的產率。因
此,本章將詳細地描述我們經常使用的以去污劑為基質的沉淀提取方法,
對于其它的方法,作者可以參閱上面提到的文章或參考文獻,我也向讀者
建議去參考分子研究中心(Molecular ResearchCenter)的植物提取液和程
序(DNAzol ES),這種方法對從某些材料中提取DNA的效果比較好,該方法
用于從老鼠糞便植物材料中提取DNA時,部分(但不是全部)效果很好(Golen
berg&Nizon,未發表)。
    全部工作區域在提取之前必須用0.5%的次氯酸鈉溶液擦洗。化石材
料可以在0.5%的次氯酸鈉溶液中蘸一下進行表面消毒,然后用蒸餾水徹
底浸洗。但是如果將要研究的是非細菌或真菌的特有基因,這種消毒并不
是絕對必須的。除去有機質后,然后將樣本在提取緩沖液中研成粉末。最
好直接在一次性的小離心管內用一次性的塑料碾槌(杵)直接磨碎組織以降
低外源污染或交叉污染,這可以手工操作或者在研杵上連接一個鉆孔機進
行研磨。當既不可能得到滅菌設備,并由于材料太硬又不可能用塑料研杵
研磨時,也可以用瓷制研缽和研杵,但必須按上述的方法用次氯酸鈉溶液
和UV進行處理。提取液中包含2%CTAB,7.4MNaCI,20mMEDTA(pH 8.0),
100mMTrisHCI(pH 8.0),1%PVP(MW二40000),4mMDEDTCA和5mMascorbica
cid(Bickel&Golenberg,未發表)。  這是改進的Golenberg(1993)提取液
,其中加了兩種抗氧化劑:DEDTCA和Ascorbicacid。最終提取液的體積為0
.7mI,樣品在65℃溫育至少]小時。然后10000g離心10分鐘來沉淀固

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