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堿性表面活性劑用于質粒DNA的處理,堿性pH值可以使染色體D
NA不可逆地變性,而質粒則為可逆變性,隨后加入合適的試劑使溶
液變為中性。在pH值為中性時,質粒DNA能復性并留在溶液中,而
染色體DNA則會與蛋白和細胞碎片等其他物質形成復雜的網狀物沉
淀,沉淀物絮凝并在1~2小時內成為多孔膠,多孔膠緩慢上浮至
表面,溶液中剩余質粒DNA和小顆粒:
盡管表面活性劑提供了一種快速而溫和的細胞裂解方式,但某
些表面活性劑即使在低濃度下仍會影響PCR過程下純化過程中沒有
被除去的殘留表面活性劑會與DNA一起被洗脫,因此,在PCR之前必
須先清除表面活性劑。
電穿孔
在強電場下使細胞破裂的方法叫電穿孔。在這種狀態下,細胞
膜會發生劇烈的改變而變得具有呵滲透性。電穿孔的應用主要有細
胞電轉化和通過吸收外源DNA或RNA進行外加電基岡轉移(主要用于
植物、動物、細菌和酵母菌)。電場在細胞膜卜產生可滲透的小孔
,核酸就可以通過電滲或擴散導入。
在電穿孔過程中產生的小孔可以立即被填上,然而如果電場足
夠強.細胞膜就會產生不可逆的機械破壞
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