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電泳分離得到的蛋白質能夠直接通過凝膠染色顯色
過程分別以電荷和分子大小為基礎分離蛋白質,從而能夠在單一的
雙向凝膠中分辨幾千種蛋白質。單元7.3中闡述了利用雙向等電聚
焦/SDS-PAGE分離蛋白質的一些方法。除此之外,這一單元還介紹
了一種雙向非還原/還原電泳的方法,即蛋白質在第一向非還原條
件下和第二向還原的條件下進行sD孓PAGE的分離。這一類型雙向凝
膠電泳能夠分析分子內含有二硫鍵的多種蛋白質復合物。這兩類雙
向凝膠電泳既可作為分析,又可作為制備之用。為進一步分析或純
化蛋白質,也可用單向IEF平板凝膠進行蛋白質的分離。
聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質的局限性是蛋白質的分子質量
要小于300 000Da。大的蛋白質或多種蛋白質復合物的電泳分離需
要使用其他的凝膠基質。瓊脂糖是比較合適的基質,它普遍用于DN
A的分離。利用瓊脂糖凝膠電泳分離蛋白質的方法。除了能夠分離
非常大的蛋白質,這些方法還能分析多聚物或聚合體。雖然這些過
程也能夠通過蔗糖梯度離心(單元6.2)或凝膠過濾(單元6.3)進行
分析,但是瓊脂糖凝膠電泳更便于對大量的樣品進行分析。
電泳分離得到的蛋白質能夠直接通過凝膠染色顯色。對四種基
于不同原則的對凝膠中的蛋白質染色的方法進行了介紹。這些染色
過程包括考馬斯亮藍染色、銀染、SYPR0 ruby染色和鋅染。這一節
介紹了基本的實驗方法并對如何選擇高效的方法提供了指導。
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