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一般在用蟲生真菌免疫抗血清的制備分析實驗
抗血清的制備
1.免疫動物實驗室常用的免疫動物有家兔、山羊、豚鼠和雞等。
用于免疫的動物應適齡、健壯,無傳染性疾患,最好為雄性。此外還需
十分注意動物的飼養,以消除動物的個體差異以及在免疫過程中死亡的
影響。若用兔時最好一組3只,兔的大小以2—3kg為宜。
2.免疫途徑免疫途徑多種多樣,如靜脈內、腹腔內、肌肉內、皮
內、皮下、淋巴結內等,一般傾向于多途徑免疫,但一次不應超過兩種
途徑。途徑的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性,如分生孢子一
類顆粒狀抗原一般通過靜脈途徑。
3.免疫佐劑佐劑(adjuvant)又稱免疫增強劑,是指與抗原同時注
射或預先注射,能非特異性地增強或改變機體對抗原免疫反應的物質。
佐劑能延長抗原在機體內的存留時間,并能增加抗原表面積,使抗原與
淋巴系統細胞充分接觸。常用的有福氏完全和不完全佐劑及明礬佐劑,
其制備方法見張龍翔等。一般在用蟲生真菌免疫時,由于抗原來
源豐富很少用佐劑。
4.免疫程序(以球孢白僵菌為例) 選好2—3婦的健康雄性家兔,
經耳緣靜脈進行注射。白僵菌孢子注射濃度為107孢子/ml,注射6次;
茵絲體清液的注射濃度為o.1~o.49濕菌體/ml,注射量約為1ml/kg
體重,共免疫4次。免疫完成之后,先抽少量血測試抗體效價,效價達
到試驗要求后即可進行抽血。如效價不高還可繼續加強免疫,直到達到
要求為止。
測試效價時從耳靜脈抽血或心臟采血1m1以上,用環狀沉淀或瓊脂
雙擴散方法測定效價。
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