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然蛋白質功能的研究通常只需要微量的蛋白質
要想成功的研究一種蛋白質的結構,純化這種蛋白質分子是必需的
。通常這是一項巨大的任務,特別是蛋白質以低濃度(甚至少到每個細
胞10個分子)存在于細胞內時。純化還經常包括從一種含有上萬種不同
蛋白質的細胞中純化一種蛋白質。理想的目標是獲得單一蛋白質并使得
到的蛋白質保留它的全部或者大部分的天然(體內)性質。本章重點講的
是現在通用的分離和純化蛋白質的方法。
雖然蛋白質功能的研究通常只需要微量的蛋白質(通常少于lng或lp
m01),但是用于結構研究時則需要較大量的蛋白質,通常需要10 mg純
蛋白質。總的來說,蛋白質的純度和產量經常使實驗者很矛盾。然而許
多蛋白質結構被成功解析證明了現在在蛋白質生物化學研究領域分離和
純化蛋白質技術的提高。其中許多方法是從簡單的、比較粗糙的實驗方
案發展到復雜的、電腦控制的強大的程序。這些快速的發展又得益于生
物信息學和數學科學的共同發展。
蛋白質的分離與特性描述
現在有兩種主要的方法來分離蛋白質。通常直接從機體獲得所需的
細胞或組織,或者用分子生物學的方法在宿主(如大腸桿菌)中表達所需
的蛋白質。現在通過分子生物學手段把編碼所需蛋白質的DNA插入到載
體中使蛋白質在大腸桿菌中更高效的表達是更為通用的方法。
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