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熒光漂白
光漂白(也稱為褪色)是在光照條件下使其發生化學反應或結構改變
,從而失去發熒光的特性,就是所謂的漂白。它常用于生物體內擴散速
率常數的測定。由單重激發態躍遷到三重激發態,熒光團會和另外的分
子反應產生不可逆的共價修正。簡而言之,熒光漂白是熒光團的光化學
破壞。在熒光漂白之前,某一特定熒光團的激發和輻射周期的平均數值
取決于分子結構及所處環境。一些熒光團漂白很快,只需釋放一些光子
,然而對于其他的,在漂白之前需要經歷成千上萬次周期。
每一個熒光團都有不同的光漂白特性。對于激光共焦熒光
顯微鏡來
講,光漂白是最大的問題,因此實際測試中需要考慮避免或減輕光漂白
程度。因此在激光共焦熒光顯微鏡測試中,需要選取合適的染料,該染
料可以在正常激光強度照射下最大程度減輕光漂白程度。當具有光漂白
的染料用于測試中,以下三種方法可以降低光漂白程度:盡可能用低的
激光強度;盡可能降低照射的時間(實際測試中,盡快完成一次測試);
采用自由基清除體。
多數的光漂白可以歸結于自由基。采用自由基清除體則能降低光漂
白的速率。常用自由基清除體包括五倍子酸丙烷、對苯二胺以及三乙烯
二胺(DABCO)。
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