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本文標題："用于觀察某動物囊胚期細胞用專業光學顯微鏡"
新聞來源：未知 發布時間：2013-10-28 14:39:58 本站主頁地址：http://www.pzfczx.com
用于觀察某動物囊胚期細胞用專業光學顯微鏡
囊胚期胚胎顯微注射
儀器
顯微注射操作臺
材料
1. 懷孕 3.5 天母鼠
2. 37℃、5% CO2 恒溫培養箱
3. 胚胎干細胞培養液（ES培養液）
4. ES 細胞
5. PBS、Trypsin/EDTA、礦物油
6. 嘴吹式胚胎傳送毛細玻璃管、顯微注射針及顯微胚胎固定針
7. 凹槽之載玻片
8. IM
實驗步驟
1. 由懷孕 3.5 天母鼠子宮收集囊胚（方法見 以mitomycin C 處理纖維母細胞）
2. 將受精卵以口吹式毛細管放入含 ES 細胞培養液中，并覆蓋礦物油避免蒸發，
再放入 37 ℃、5% CO2 培養箱中備用。
3. 于進行顯微注射前約 1~2 小時，準備 ES 細胞。
4. 取 ES 細胞液一滴，滴于凹槽載玻片中央，并覆蓋礦物油，避免蒸發。
5. 以毛細管吸取胚胎至玻片上 ES 細胞液中（一次約取 10 顆左右胚胎即可）。
6. 于顯微注射操作臺之高倍視野（400X）下，
以顯微注射針仔細吸取飽滿光亮之 ES 細胞約10~15顆。
7. 另以顯微胚胎固定針吸附一顆囊胚。
8. 在高倍視野下，將顯微注射針尖和被吸附之胚胎調整一致焦距，且肉眼可清晰觀察。
9. 小心將顯微注射針穿刺入囊胚空腔中，須注意不可由含內在細胞層（ICM, inner cell mass）
之一側穿刺，且穿刺時盡量避免傷害滋養外胚層細胞。
10. 轉動油壓注射器，將 ES 細胞注入。
11. 抽出注射針，并釋放完成注射之囊胚。
12. 重覆步驟 6，繼續進行下一顆囊胚之注射
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