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本文標題："細胞透明且帶有光澤但不是圓形呈不規則形狀"
新聞來源：未知 發布時間：2012-11-18 2:46:23 本站主頁地址：http://www.pzfczx.com
我目前所做的實驗叫做''phagocytosis assay''
首先取出腹腔與骨髓細胞，lyse掉紅血球細胞，在以1xPBS
wash，最后回溶于1 ml 1xPBS，取10 ul細胞+10 ul 0.4% trypan blue混均勻后，取10 ul滴于血球計數器去計算活細胞，我主要是要算macrophage和neutrophil，染了trypan blue后，在顯微鏡下以10x去算活細胞。本來實驗室都是直接取10 ul滴于血球計數器去計算活細胞，但是我算出來的細胞都比別人少很多，所以后來改用染trypan blue去計算，不過算出來還是比別人少。為什么呢?
我目前有幾個問題
1.細胞 染trypan blue后 ，活細胞呈現透明帶有光澤且為圓形，對嗎?
2. 但是有些細胞雖然為透明且帶有光澤，但不是圓形，呈不規則形狀，請問這樣的細胞是快死了還是被刺激所以呈現要吞噬的形狀(我用的tip和1xPBS都是滅菌的)，請問這樣的細胞算活細胞嗎?
3. 有些細胞雖然為透明且帶有光澤，但是比要算的細胞小一號有的更小，這是活細胞嗎還是氣泡?
有的比要算的大，是活細胞嗎?
用cytometer數細胞時有幾點要注意不知道你有沒有做到？
chamber邊界問題、細胞液的稀釋倍率、換算原細胞液的公式
還有你是否有先把細胞打散成單一細胞，而不是有些細胞還聚在一團
染trypan blue后活細胞是發光透明狀，因活細胞細胞膜沒有破裂，染劑進不去細胞，自然就染不到了
你的實驗步驟中提到用1x PBS回溶，是否有注意在最短時間內loading細胞液至chamber內呢，說不定是因為實驗手法影響到細胞
做實驗有時也需要經驗，多試幾次，如果還是一樣，可以考慮在別人進行實驗時在一旁觀摩，或者請實驗室的其他人帶者你一起做，一起找出錯誤
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