環境荷爾蒙和環境激素簡介！

建立以酵母菌的生物效應作為環境荷爾蒙中雌性激素的偵測指標。

本試驗將以經過基因轉殖的酵母菌PL3作為雌性效應的生物測試指標，以人造雌性荷爾蒙作為試驗的參考物質，并以分光光度計與顯微鏡計數細做比較，細胞濃度過高均需經過稀釋而后上機分析；顯微鏡計數費時，分光光度計于細胞濃度過低偵測不到，但較為迅速，

推估數目與顯微鏡推估值相當。以分光光度計分析選擇波長600 nm可降低培養液的干擾。初始細胞濃度過高50000或100000 cell/well，若以96孔盤培養，因不易達混合效果，會造成細胞集結的現象，造成高估的結果。人造雌性激素雌二醇與乙基雌二醇對此酵母菌增生試驗，以乙基雌二醇效果較雌二醇佳，生長速度較快。以乙基雌二醇做測試，50 ppn即可促進酵母菌PL3增生，反應相當靈敏。

許多人造的工業化學物質及農藥可能干擾人類及野生生物體內分泌正常功能進而影響其生長、發育、行為及生殖。雖然農藥及工業化學物質，在上市前已做過大部分的毒性測試，如對老鼠或兔子的半致死濃度(LD50)、對兔子皮膚接觸毒性、對兔子眼睛毒性等等，但是傳統的毒性測試不易檢測出物質對生物內分泌系統的影響。故美國國會促其環保署增訂內分泌測試方法，以利評估其對人類或生態的影響。

具有內分泌系統的生物很多，包括哺乳類、非哺乳類(如兩棲、爬蟲類及魚類)及無脊椎動物(軟體動物如蝸牛、節肢動物如龍蝦、昆蟲及其他種類)。內分泌系統包括內分泌腺體及其所產生的荷爾蒙，可以調節生物的生長、發育、行為及生殖。內分泌腺包括腦下垂體、甲狀腺、副腎腺、卵巢及睪丸；荷爾蒙為內分泌腺體所分泌的生物化學物質，經血液運輸至身體各部位，藉以調控標的器官或組織的生理功能。在五十多種已知的脊椎動物荷爾蒙中，雌性激素、雄性激素、甲狀腺素，對生長、發育、行為及生殖等生理機能扮演重要角色。

干擾這個複雜的系統可經由許多不同途徑。如有些化學物質會模擬天然的荷爾蒙，”愚弄”身體對此”假”刺激于不當的時機做過多的反應；另外有些化學物質可能阻礙組織或器官的荷爾蒙接受器與正常荷爾蒙鍵結；甚至有些化學物質直接與內分泌腺體作用，抑制或刺激產生荷爾蒙，直接或間接影響體內荷爾蒙的作用，導致生長遲緩、性別演化異常、繁殖能力降低、癌癥腫瘤罹患率增加等，因有別于生物體內自然生成的荷爾蒙，簡稱環境荷爾蒙(environmental hormones )又名內分泌干擾物質(endocrine disruptors)。

化學物質種類繁多，市面流通竟達87000種以上，逐一進行測試將耗費大量資金、時間與試驗生物的生命，美國環保署成立內分泌干擾物質篩選及測定方法諮詢委員會(Endocrine Disruptor Screening and Testing Advisory Committee, EDSTAC)，針對環境中可能干擾內分泌干擾系統的化學物質，建立ㄧ完善的評估模式。這個委員會于1998年8月報告中提出分級或分層方式篩選及測試具內分泌干擾物質，其步驟包括剛開始的分類(Initial Sorting)、優先順位的設定(Priority Setting)、第一階段篩選(Tier One Screening)及第二階段篩選(Tier Two Screening)。內分泌干擾物質篩選及測定方法諮詢委員會一開始目標設定為化學物質對雌性激素、雄性激素及甲狀腺素的影響，因為此三種荷爾蒙掌控主要的生殖、發育及生長等生理作用，爾后對此三種荷爾蒙研究所累積的資料，再推估其他荷爾蒙可能受到的影響。

其中第一類篩選(Tier One Screening)測試方法中又分為活體內(in vivo)與活體外(in vitro)生物測試，活體內生物試驗有為期三天雌鼠體子宮增生試驗(a rodent 3-day uterotrophic assay)、為期20天之青春期雌鼠甲狀腺試驗 (a rodent 20-day pubertal female assay with enhanced thyroid endpoints)、鼠體Hershberger分析試驗(a rodent 5 to 7-day Hershberger assay)、青蛙成長過程期間之型態變化測試(a frog metamorphosis assay)、魚性腺再現分析(a fish gonadal reproductive screening assay)；活體外生物試驗有雌性激素受體鍵結效應及指標性基因測試(an estrogen receptor binding or reporter gene assay)、雄性激素受體鍵結效應及指標性基因測試(an androgen receptor binding or reporter gene assay)、睪丸剁碎勻漿培養之類固醇增生效應(a steroidogenesis assay with minced testis)。第二階段的進階試驗則是將第一階段檢測完具有干擾效應的化學物質進一步以生物包括鳥類、魚類、無脊椎、兩棲類等生物進行檢測�，F今仍以第一階段檢測方式較常用，而活體外檢測技術又較活體生物簡單、快速、一致，實驗室間資料又可互相比較，因此所研發的技術發展很快，包括細胞增生試驗(cell proliferation assays)、重組質體/報告基因(recombinant receptor/reporter gene assays)、酵母菌分析(yeast-based)等。

酵母菌的特性及基因已完全被解讀，培養簡單、經濟又方便，堪稱為真核的大腸桿菌，可作為生物測試篩選的指標生物。本研究將已轉殖指標基因之酵母菌進行有關環境荷爾蒙雌性激素生物效應的檢測。