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本文標題："快速鑒定腸道桿菌科細菌及其他革蘭氏陰性菌！"

細菌快速鑒定方法

一、目的

應用迷你多項生化檢測系統（miniaturized multi-test systems）快速鑑定細菌。

本試驗以 API 20E 簡易鑑定套組為例，鑑定腸道桿菌科細菌及其他革蘭氏陰性菌。

二、原理

API 20E 套組有 20 個小管，內含特定的乾燥基質，可進行 23 種生化試驗之判

讀。各項生化試驗依判讀標準表判讀及記錄，再計算出 7－9 個數字之菌碼
（profile

number）
，最后應用菌碼索引（analytic profile index）查出該菌碼所對應之細菌菌

名，即為待測細菌之菌種名稱。

三、材料與設備

(一) 材料

1. 培養18-24小時之純化Klebsiella pneumoniae

2. API 20E 細菌快速鑑定套組。

(二) 設備

1. 培養箱

四、方法與步驟

1. 將待測細菌進行氧化 （oxidase）試驗，確定為陰性反應后再進行以下試

驗。

2. 加 5 ml 水至培養托盤內之孔洞中，以保持盒內之濕度，并在盤上進行標示。

3. 取出 API 20E 快速鑑定套組并置入培養托盤內。

4. 加 5 ml 之無菌蒸餾水至無菌試管內。

5. 挑取 1-2 個純化之菌落并懸浮至無菌蒸餾水中。

6. 于各試驗孔之管中 (tube) 加滿菌液。

7. 在 CIT, VP 及 GEL 試驗孔之管頭 (cupule) 加滿菌液。

8. 在 ADH、LDC、ODC、H2S、URE 試驗孔上加入無菌礦物油。

9. 蓋上培養蓋，于 37℃培養 18~24 小時后進行判讀。

10. 先將不需加加入試劑即可判讀之各項試驗進行判讀 (參考判讀表) 并記

錄。

1) 若 GLU 呈陽性及／或 3 個以上試驗呈現陽性則在以下試驗孔加入試劑后

判讀：

TDA 試驗 – 在 TDA 試驗孔加入一滴 TDA 試劑后即可判讀；

IND 試驗 -- 在 IND 試驗孔加入一滴 James 試劑后判讀；

VP 試驗 -- VP 試驗孔加入 VP1 及 VP2 試劑各一滴，10 分鐘后判讀；

NO2 還原試驗 -- 在 GLU 試驗孔加入 NIT1 及 NIT2 試劑各一滴，2~3

分鐘后判讀。若為陰性反應 (黃色) 則加入 2-3 mg 鋅粉，5 分鐘后若仍

呈黃色則為陽性反應，若呈紅色則為陰性反應。

2) 若 GLU 為陰性且其他反應呈陽性者少于２個，則將 API 套組再培養 24小時后如同上述加入各種試劑并進行判讀。