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本文標題："組織切片顯微鏡觀察的技巧？顯微鏡小知識！"

石蠟切片觀察
目的  學習組織切片觀察的技巧
原理  石蠟切片的原理是將樣本的組織灌入石蠟,使得其質地像石蠟一般(想想化石形成的原理),才能既而將其切成約10μm的薄片而不損壞樣本的構造形狀。樣本應依序經由
1)固定.
2)脫水
3)包埋.
4)切片.
5)染色及
6)封片
等步驟製作成可觀察及保存的玻片標本.
材料  美國螯蝦1公分的幼蝦(或其他沒有過硬外骨骼之小樣本皆可)
設備  rotary microtome(迴旋式切片機)
water bath(水浴槽)
hotplate(加熱板)
light microscope(光學顯微鏡)
真空抽氣機(可定溫)
石蠟填充機
數位相機
電腦及影響編輯軟體
slide, coverslip
染缸若干
玻片架若干
藥品  Mayer's glycerol albumen(蛋白膠)
Xylene(histosol)(清洗劑－脫酒精，使組織透明化)
70%,80%,95%,100% alcohol(脫水劑)
Eosin
Mayers haematoyline
synthetic mount(封片膠)
石蠟
步驟  1. 固定: 在實驗開始前1-3天將活的標本浸泡于福馬林(formalin)中固定，若樣本有外骨骼，體積又相對的較大(1cm)時可以細解剖刀片在其表面劃幾刀使福馬林較易滲入。
2. 脫水: 依序由低濃度到高濃度(最后為100%)的酒精漸進脫水
70% alcohol 1.5hr
80% alcohol 1hr
95% alcohol 1hr
95% alcohol 1hr
100% alcohol 1hr
100% alcohol 1.5hr
histosol 1.5hr for dealcoholization
histosol 1.5hr
3. 包埋: 將樣本置于樣本皿中間底部，填充石蠟(石蠟填充機要先預熱使石蠟融化),真空抽氣使石蠟滲入組織(65℃)，之后由65℃真空抽氣機中取出后靜置待其自然冷卻。
wax (with vacuum) 1.5hr
再填一次wax(with vaccuum) 1.5hr
4. 切片:將樣本周圍多出的蠟塊以單面刀片修去，修成合適的梯形。將樣本卡于切片機的樣本放置處，設定好角度使梯形的上下邊與刀片平行，并使突出的面恰與刀片相接。安置好樣本后，調整切片機刀片的角度(約10度)及切片厚度(約10μm)，轉動把手切片，使切片成帶狀且不捲曲(若不能則再檢查刀片，角度等因素作適度調整)，用水彩筆輕挑至溫水(45℃水浴槽)中展蠟,用事先準備好之沾有蛋白膠之玻片(需確定玻片上的蛋白膠已夠乾之后樣本才不會在染色過程中脫落)撈起蠟片并烘乾(45℃加熱板)
5. 染色: 將沾有樣本的玻片排列于鐵架中，依下列順序經各染色缸中染色。注意回水及脫水的程序及染色時間，可嘗試不同的染色時間已得到最好的效果:
xylene 15min
xylene 15min
100%alcohol 6dips 以下四步為脫蠟回水步驟
95%alcohol 6dips
80%alcohol 6dips
70%alcohol 6dips
water 15min
Mayers haematoyline 約10min　以下三步為染色步驟
Water 10min
Eosin 6dips
70%alcohol 6dips
80%alcohol 6dips
95%alcohol 6dips
95%alcohol 6dips
100%alcohol 6dips
100%alcohol 6dips
xylene 10min 脫酒精
xylene 10min
6. 觀察顏色是否適當,是的話用封片膠封片,注意避免產生氣泡
7. 將欲觀察的部位在光學顯微鏡下以數位相機拍照，再用影像編輯軟體組合，紀錄。
時間  樣本準備1-3天，脫水1天，切片＋染色＋封片觀察約3hr
備注  通常樣本的準備(1)-(2)需要1-3天