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③涂片。
1.包埋處理和超薄切片 為了獲得系列切面,需要將組織脫
水后包埋在適宜的介質(石蠟)中以支撐材料防止材料在切片過程中
變形。這對于觀察不同發育階段組織的連續變化、花藥中減數分裂
不同時期的花粉母細胞變異和體細胞中有絲分裂變化都是有用的。
沖洗程序包括以下步驟:
(1)沖洗固定后的組織在流水下完全沖洗24h(如果固定在金屬
離子固定劑中)以洗去固定液中所有成分。
脫水:組織經過30%、50%、70%、80%、90%、95%和100
%等不同梯度系列的酒精中,每種濃度處理1h,最后在70%或純酒
精中過夜。
(2)透明 由于石蠟不與脫水的酒精相混,需要使用另一個媒
介。用酒精脫水后,將組織采用酒精:氯仿梯度為3:1、1:1和1
:3的混合液分別處理,每步1h,最后保存在純氯仿溶液中lo~30r
ain。
(3)滲透將低熔點的石蠟小片放入含有樣品組織的容器內,蓋
好保持37 C下48h。然后打開保持24h,放人45 C水浴鍋中過夜,最
后轉到55~60 C的水浴鍋中。當石蠟溶解時,樣品組織隨著石蠟的
包埋而發生變化,最終將沒有氯仿氣味釋放出來。
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