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蒲葵; 內生棲生菌; 核糖體核糖核酸; 聚合酵素連鎖反應; 親緣關系
內生真菌是指在其生活史中的某一段時期生活在植物組織內,對植物組織沒有引起明顯病害癥狀的真菌。內生真菌研究是近二十年來比較活躍的新領域,它豐富了我們對真菌生物多樣性的認識。目前,內生真菌研究的基本步驟為:植物組織的表面消毒,在營養培養基上培養植物組織,內生真菌的分離和純化,根據經典形態學方法鑑定菌種。在此研究過程中,即使我們用不同的營養培養基和在不同的培養條件下培養植物組織,也不能保證所有生活在植物組織內的真菌全被分離出來,可能有的內生真菌不能在人工培養基上生長;另外,雖然在分離營養培養基中加入一些抑制真菌增長的化學物質,但是還是有一些生長緩慢的真菌常被生長快的真菌所覆蓋,同樣很難分離到這類生長緩慢的真菌。為了克服現行經典研究方法帶來的缺陷,我們用分子生物學技術直接從植物組織內檢測和鑑定內生真菌。健康的蒲葵樹葉經過表面消毒后,用CTAB法提取總DNA,然后用PCR擴增 rDNA的ITS(ITS1, 5.8S, ITS2)片段,將PCR產物選殖到pGEM上,測定選殖的堿基序列
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